从竹荪中选取新鲜、健壮的竹荪子实体或竹荪蛋，先用无菌水冲洗，后放入接种箱用75%的酒精或0.1%的升汞溶液擦洗，然后再用无菌水冲洗，并用纱布吸干水分，最后用锋利的手术刀切开，划成黄豆大小的菌块组织，接入培养基的斜面上。接种材料以菌蛋为好。接种后，置15~18℃下培养，约25~30天菌丝长满斜面，即为母种。