Sephadex LH20的分离原理主要有两方面:以凝胶过滤作用为主,兼具反相分配的作用(在反相溶剂中)。
因为凝胶过滤作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脱下来,小分子的化合物保留强,最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱, Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用,所以极性大的化合物保留弱,先被洗脱下来,极性小的化合物保留强,后出柱。如果使用正相溶剂洗脱,这主要靠凝胶过滤作用来分离。
葡萄糖凝胶柱色谱洗脱顺序
加完样品后,打开下口缓慢放出液体至液面 与凝胶面相齐,再用少量蒸馏水冲洗原来盛样品的容器 2-3 次,待全部 进入层析柱后,即可进行洗脱。