步骤如下

1、用1.8~0.9 倍体积的水溶解粉末状培养基，不断搅拌。

•如果是商品化液体培养基，直接加青霉素、链霉素储存液，进入步骤8 。

2、加一定量HEPES 溶液，在终体积培养基中为15mmol/L 。

3、按生产商推荐剂量添加NaHCO3（例如， 5 % CO2压力下， NaHCO3的浓度为14~36mmol/L) 。

4、加谷氨酰胺，终浓度为0. 01% (w/ v) 加丙酮酸，终浓度为0. 01% (w/v) 。

5、加青霉素G， 终浓度为100IU/ ml 加硫酸链霉素，终浓度为50μg/ml 。

6、5mol/L NaOH 溶液调节培养基pH 至7. 4， 补足水至终体积(1 X ) 。如果需要，再调整pH 。

7、用0. 2μm 微孔滤器过滤培养基， 4°C 避光存放。

8、用时按需加入牛血清。