底物法是肝素效价检测的一种方法，又叫发色底物法。以其较好的重现性和抗干扰性而受到青睐，是USP和EP的指定方法。

发色底物法原理：

肝素(包括低分子肝素和硫酸乙酰肝素)分子链上特定的五糖序列与抗凝血酶III (AT III) 结合并诱导AT III产生构型变化，使其活性部位的丝氨酸更为暴露，由此增加了AT III结合及失活活化凝血因子的能力。

抗凝血酶III-肝素复合物的主要靶物为IIa因子 (凝血酶) 和Xa因子，因此可以分别检测肝素的抗FIIa活性及抗FXa活性。