雌性树袋熊在2岁大的时候进入性成熟期，并开始繁殖。雄性也可以在这个年龄进行繁殖，但此时的交配成功率通常很低，直到它们年龄更大(约4-5岁)，体型大到足够对雌性展开成功的竞争时，这种情况才会得到改变。

到了繁殖季节，成年雄性在夏季的夜晚会在很大的范围里走来走去。如果雄性遇到另只成年的雄性，通常就会发生争斗如果雄性遇上一只处于发情期的雌性，它们可能会进行交配。交配时间很短，一般少于2分钟，并在树上进行。雄性从后面爬到雌性身上，交配的时候通常把它抱在自己和树枝之间。