400倍显微镜标尺是500倍放20um。

如果对精度要求不高，只是把标尺附到400倍金相图片上做大概参考的话是可以的，如果要求精细，肯定是需要定标的。定标需要C1测微尺。

而且显微镜的物镜虽然都说是40倍，但这只40倍跟另外一只40倍放大倍数肯定不完全一样，是有误差的，正负差，还有用的摄像头靶面是二分之一，三分之一拍出来的图片在同一个物镜下也是不一样的。