深低温保藏的细胞十分脆弱，要轻柔操作。快速解冻深低温保藏的细胞，然后直接将其接种到完全生长培养基中，如果细胞对抗冻剂（DMSO或甘油）特别敏感，则离心除去抗冻剂，然后将细胞接种到完全生长培养基中。下面是深低温保藏细胞的建议解冻步骤：
直接接种法
1．从冻存管中取出细胞，用37℃水浴快速解冻。
2．将细胞直接接种到完全生长培养基中。每毫升冻存细胞需要10-20ml完全生长培养基。计算活细胞的个数。细胞接种量至少要达到3X105 活细胞/ml。
3．将细胞培养12-24h。更换新鲜完全生长培养基以去除抗冻剂。
离心法
1．从冻存管中取出细胞，用37℃水浴快速解冻。
2．将1-2ml 冻存细胞接种到大约25ml完全生长培养基中。要非常轻柔地进行混合。
3．用大约80 X g的速度离心2-3分钟。
4．吸除上清液。
5．用完全生长培养基轻轻重悬解离下来的细胞，并计算活细胞的个数。
6．接种细胞。细胞接种量至少要达到3X105 活细胞/ml。
