GC含量高，说明解链温度高，目的条带在较高温度才会解链，而在未达到解链温度时，引物会以未完全解链的DNA为模板，进行PCR非特异性扩增，所以易出现非特异性条带。
提高退火温度，DNA复性增加，减少非特异性互补机会，使非特异性条带减少。
为什么gc含量高就要提高退火温度
因为在化学结构中GC之间有三个氢键，而AT之间只有两个氢键，因此GC含量越高，要打开氢键的能量就要求越大，即退火温度越高.
GC只能分析气体，液体在毛细管中会发生堵塞。因此有机液体均要经过高温的汽化室变为气体，然后被载气带入色谱柱和检测器。因此要加高温而HPLC本来就是用高压的溶剂带着样品去分离的，样品和溶剂都要保持在液体状态，当然不用要高温。否则不就汽化了嘛...
