接通电源，旋动温度调节旋扭，使温度逐渐升至160—170~C，恒温2小时，然后切断电源。

当温度降至70。C以下时，方可打开箱门，待温度降至室温后将灭菌物品取出。如在高温时打开，玻璃器皿会因突然降温而破裂。

用恒温干燥箱灭菌，只适用于玻璃器皿及金属用具，对于培养基等含水分的物质则不能使用。如灭菌物品用纸包扎或带有棉塞时，必须控制温度不可超过170~C，否则容易燃烧。在相同的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌的效果好。