上样缓冲液连成一线没关系，一般上样缓冲液的条带要比蛋白的宽，你转完膜染一下蛋白看看线稍许不平也没关系，跑10分钟蛋白还在浓缩胶，到分离胶会逐渐平整的。下次检查一下上样孔下面是否平整，如果歪的话跑出来条带也会歪。