检测培养基是否被污染的方法有

常用的检测方法有培养法、荧光染色法、PCR法和电镜观察法。

培养法是最为可靠且成本低廉的方法，但培养周期较长，常用于细胞以及临床治疗细胞的支原体检査

荧光染色法是用特异荧光染料(Hoechst 33258)染色后在荧光显微镜下进行检测，荧光染料(Hoechst 33258)是一种能和DNA特异结合物质，如果检测样品为支原体污染，则附在细胞表面和分散在细胞与细胞之间的支原体DNA着色，在荧光显微镜下可见

PCR法检测是通过对支原体特定的序列设计引物，当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增，会将目标DNA特异性的复制，然后通过琼脂糖电泳观检测，会跑出条带出现阳性结果，反之当没有支原体污染时，由于没有模板，PCR无法扩增，则琼脂糖电泳跑不出条带，出现阴性结果电镜观察法是利用电子显微镜的超级放大功能，直接观察培养细胞中支原体污染情况。

在此主要介绍利用荧光染色法来检测培养细胞中的支原体，具体检测步骤如下:

(1)细胞爬片培养:待测细胞培养至传代水平，将细胞消化后接种至含有玻片的细胞板中，培养至60%-70%汇合时，进行检测

(2)漂洗:将细胞板中的培养液吸出，取出玻片，用PBS轻轻漂洗

(3)固定:加入适量的固定液，室温放置10min

(4)漂洗:用PBS轻轻漂洗3次

(5)染色:加入适量的荧光染料(Hoechst 33258)工作液，在室温下放置10min

(6)漂洗:用PBS轻轻漂洗3次

(7)镜下观察:将玻片晾干后，滴加抗荧光猝灭剂，于荧光显微镜下观察、拍照

检测培养基是否被污染的方法有

检测步骤如下：

1、固体培养基可以37摄氏度培养24h观察有无杂菌生长

2、液体培养基可以无菌操作取0.1ML涂布到无菌蛋白栋牛肉膏培养基上37摄氏度培养24h观察有无杂菌生长.