双孢菇母种是用组织培养的方法制作的。首先选一株好的双孢菇清洗干净。然后放入超净工作台中，和各种使用工具一起杀菌30分钟。

操作时先把双孢菇的菌伞和菌柄切开。在两者结合处取出一块菇肉。3-5克就可以。放入到做好的试管培养基中。拿出培养就可以了。