引物长度，碱基组成，引物使用缓冲的离子强度有关。 长度为25mer以下的引物，Tm计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T) 对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为： Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size 公式中，Size = 引物长度。 用Primer5.0，DNA MAN，DNA STAR都可以算，我从来没自己算过。